1.检查时机
脑脊液穿刺的时机与疾病有关，化脓性脑膜炎于发病后1～2d、病毒性脑膜炎于发病后3～5d、结核性脑膜炎于发病后1～3周、疱疹性脑膜炎于流行性感冒前驱症状期开始后5～7d穿刺采集标本。
2.标本采集
腰椎穿刺成功后立即测定脑脊液压力，然后留取脑脊液标本于3个无菌试管中，每个试管1～2ml。第一管作病原生物学检验，第二管作化学和免疫学检验，第三管作理学和细胞学检验。标本采集后应立即送检，并于1h内检验完毕。
标本放置过久，可造成细胞破坏、葡萄糖等物质分解、细菌溶解等，影响检验结果；标本应尽量避免凝固或混入血液，若混入血液应注明。
理学检查1.颜色
正常脑脊液无色透明，新生儿胆红素较多可呈黄色。
当中枢神经系统有炎症、损伤、肿瘤或梗阻时，破坏了血-脑脊液屏障，使脑脊液成分发生改变，而导致其颜色发生变化。脑脊液呈黄色称为黄变症。
2.透明度
正常脑脊液清晰透明。脑脊液的透明度与其所含的细胞数量和细菌多少有关，当脑脊液白细胞超过×/L时，可呈浑浊；脑脊液中蛋白质明显增高或含有大量细菌、真菌时，也可使脑脊液浑浊。结核性脑膜炎的脑脊液可呈毛玻璃样的浑浊，化脓性脑膜炎的脑脊液呈脓性或块样浑浊，穿刺损伤性脑脊液可呈轻微的红色浑浊。
3.凝固性
正常脑脊液放置12～24h后不会形成薄膜、凝块或沉淀。
脑脊液形成凝块或薄膜与其所含的蛋白质，特别是与纤维蛋白原的含量有关，当脑脊液蛋白质含量超过10g/L时，可出现薄膜、凝块或沉淀。化脓性脑膜炎的脑脊液在1～2h内呈块状凝固；结核性脑膜炎的脑脊液在12～24h内呈薄膜或纤细的凝块；神经梅毒的脑脊液可有小絮状凝块；蛛网膜下腔梗阻的脑脊液呈黄色胶样凝固。
脑脊液同时存在胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离（蛋白质明显增高，细胞正常或轻度增高），称为Froin-Nonne综合征，这是蛛网膜下腔梗阻的脑脊液特点。
4.比密
脑脊液比密为：腰椎穿刺1.～1.，脑室穿刺1.～1.，小脑延髓池穿刺1.～1.，凡是脑脊液中的细胞数量增加和蛋白质含量增高的疾病，其比密均增高。常见于中枢神经系统感染、神经系统寄生虫病、脑血管病、脑肿瘤、脑出血、脑退行性变和神经梅毒等。
显微镜检查1.细胞计数：
①标本采集后应在1h内进行细胞计数。标本放置过久，细胞可能凝集成团或被破坏，影响计数结果。
②标本必须混匀后方可进行检查，否则会影响计数结果。
2.校正与鉴别：
①因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白细胞计数结果必须校正，以消除因出血带来的白细胞。
②细胞计数时，应注意红细胞、白细胞与新生隐球菌的鉴别。新生隐球菌不溶于乙酸，加优质墨汁后可见未染色的荚膜；白细胞也不溶于乙酸，加酸后细胞核和细胞质更加明显；红细胞加酸后溶解。
化学与免疫学检查蛋白质
脑脊液蛋白质含量增高是血-脑脊液屏障功能障碍的标志。由于脑脊液清蛋白只来自血清，因此，RAlb更能反映血-脑脊液屏障完整性。脑脊液蛋白质增高可见于中枢神经系统的感染、梗阻和出血等多种疾病。
蛋白商反映了脑脊液球蛋白与清蛋白的比例变化。
①蛋白商增高：提示脑脊液球蛋白含量增高，见于多发性硬化症、神经梅毒、脑脊髓膜炎、亚急性硬化性全脑炎等。
②蛋白商减低：提示脑脊液清蛋白含量增高，见于化脓性脑膜炎急性期、脑肿瘤、脊髓压迫症等。
葡萄糖
1.检测原理
脑脊液葡萄糖含量大约为血糖的50%～80%（平均60%），其高低与血糖浓度、血-脑脊液屏障的通透性、葡萄糖的酵解程度有关。脑脊液葡萄糖检验多采用葡萄糖氧化酶法和己糖激酶定量法。
2.临床意义
（1）葡萄糖减低：
①细菌性脑膜炎和真菌性脑膜炎，以化脓性脑膜炎早期减低最明显；
②脑寄生虫病等；
③脑肿瘤；
④神经梅毒；
⑤低血糖昏迷、胰岛素过量所致的低血糖状态。
（2）葡萄糖增高：
①新生儿及早产儿；
②糖尿病或静脉注射葡萄糖；
③脑或蛛网膜下腔出血所致的血性脑脊液；
④病毒性脑膜炎或脑炎；
⑤急性颅脑外伤、中毒、缺氧、脑出血等所致丘脑下部损伤等。
氯化物
1.检测原理
由于脑脊液中蛋白质含量较少，为了维持脑脊液和血浆渗透压的平衡（Donnan平衡），氯化物含量约为血浆的1.2～1.3倍。氯化物定量检验方法与血清氯化物检验方法相同，测定方法有硝酸汞滴定法、电量分析法、离子选择性电极法和硫氰酸汞比色法。临床常用电极法。
2.临床意义
（1）氯化物减低：
①细菌或真菌感染，特别是化脓性、结核性和隐球菌性脑膜炎的急性期、慢性感染的急性发作期。
②细菌性脑膜炎的后期，由于脑膜有明显的炎症浸润或粘连，局部有氯化物附着，使脑脊液氯化物减低。
③呕吐、肾上腺皮质功能减退时，由于血氯减低，使脑脊液氯化物含量亦减低。
（2）氯化物增高：主要见于尿毒症、肾炎、心力衰竭、病毒性脑膜炎或脑炎。
病原生物学检查细菌学检查
1.显微镜检查
脑脊液涂片革兰染色或碱性亚甲蓝染色检查致病菌。
革兰染色用于检查肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌、大肠埃希菌等；碱性亚甲蓝染色用于检查脑膜炎球菌。显微镜检查对化脓性脑膜炎诊断的阳性率为60%～90%。
如果怀疑为结核性脑膜炎，可采用抗酸染色，油镜下寻找抗酸杆菌。
新生隐球菌检查常采用印度墨汁染色法，若呈假阳性，可采用苯胺墨染色法。
2.细菌培养
主要适用于脑膜炎奈瑟菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌等。同时，也要注意厌氧菌、真菌的培养。
寄生虫检查
1.脑脊液涂片检查
可发现血吸虫卵、肺吸虫卵、弓形虫、阿米巴滋养体等。
2.脑囊虫检查
脑囊虫补体结合试验诊断脑囊虫的阳性率可达88%；致敏乳胶颗粒玻片凝集试验诊断脑囊虫的符合率为90%；ELISA法对诊断脑囊虫病具有高度的特异性。
3.梅毒螺旋体检查
神经梅毒的诊断首选灵敏度、特异性均很高的螺旋体荧光抗体吸收试验（FTA-ABS）；其次选用性病研究实验室玻片试验（VDRL），其灵敏度为50%～60%，特异性为90%。
现多使用快速血清反应素试验（RPR）为筛检，梅毒螺旋体微粒凝集试验（TPPA）为梅毒确诊试验。
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